5
當前位置：武漢原生原代生物醫藥科技有限公司>>細胞系>>人細胞系>> U251MG/TMZ人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞
U251MG/TMZ人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞
細胞介紹
通過外植技術衍生自惡性膠質母細胞瘤腫瘤。
細胞特性
1） 來源：U251膠質瘤耐藥篩選
2） 形態：貼壁細胞
3） 含量：>1×106 細胞數
4） 用途：僅供科研使用。
U251MG/TMZ人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞
細胞運輸、保存及注意事項
復蘇細胞 | 凍存細胞 | |
包裝 | 充液的T25細胞培養瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒溫細胞培養箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉入液氮/立即復蘇 |
注意事項 | 1. 收到細胞請先就培養瓶/凍存管的外觀、細胞的狀態，進行拍照并保存，如有問題請及時聯系我們； 2. 收到的復蘇細胞，若有較多細胞飄起，可能由于運輸導致。請先置于37℃細胞培養箱中靜置2~4h，待細胞貼壁后再做處理； 3. 復蘇細胞充液培養基為不含藥物的維持培養基，收到細胞后請及時更換為*培養基； 4. 建議收到細胞后，首先進行擴增，并凍存部分細胞以備用。 | |
細胞耐藥誘導過程
待細胞生長穩定后，開始倍增藥物誘導劑量，每個劑量保持至細胞可以穩定生長至匯合度達50%以上。遞增藥物濃度依次為：0.125μg/mL，0.25μg/mL，0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL，4μg/mL，8μg/mL，16μg/mL。約8個月后，細胞可在16μg/mL TMZ藥物濃度下穩定生長，視為耐藥細胞株構建成功，并命名為U251 MG/TMZ。
細胞培養試劑的配制
1）TMZ藥物的配制及保存
建議將TMZ藥物配制成16mg/mL的母液：即使用1mL DMSO溶液溶解16mg TMZ藥物，使其*溶解。
注意：可根據用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的TMZ，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。
2）凍存液的配制
90%優質胎牛血清+10%DMSO，現用現配。
3）*培養基的配制（推薦使用h229-001b）
成分 | 體積/濃度 |
優質胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
TMZ | 0~16μg/mL |
DMEM培養基 | 補充至所需體積 |
細胞培養條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%；溫度：37℃，培養箱濕度為70%~80%。
細胞處理
1）凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL*培養基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL*培養基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL*培養基的培養瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養箱中過夜培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況，2~3day換液。
注意：①細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養基。須在細胞*貼壁，形態*展開，生長狀態穩定后，方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態較為緩慢，可適當降低TMZ的濃度，或使用不含TMZ的*培養基培養至細胞生長狀態較好時，再更換為所需的TMZ濃度；
②建議復蘇細胞時始終穿戴防護手套和面罩，避免凍存管因溫差較大而發生爆炸，造成人員傷害。
2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養。
②棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入適當體積的0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶-1mL，其它培養器皿可覆蓋培養底面即可），置于37℃培養箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養瓶使細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL*培養基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養瓶/皿中，添加6~8mL*培養基，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況，2~3day換液。
注意：細胞傳代過程中，不可使用含有藥物的培養基。須在細胞*貼壁，形態*展開，生長狀態穩定后，方可根據實驗需要添加TMZ藥物。若加藥后細胞生長狀態較為緩慢，可適當降低TMZ的濃度，或使用不含TMZ的*培養基培養至細胞生長狀態較好時，再更換為所需的TMZ濃度。
3）細胞凍存
①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
